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關(guān)于菌株
2025-10-13 1、問：斜面低溫保藏法答：將待保藏的菌種接種在合適的斜面培養(yǎng)基上,在相應(yīng)的條件下培養(yǎng)至得到充足的菌體或者孢子,隨后密封試管置于4攝氏度左右保存,具體保存溫度按照保存菌種設(shè)定.保藏時(shí)間依微生物的種類從1個(gè)月到4個(gè)月不等.此法適用范圍廣(細(xì)菌、霉菌、放線菌、酵母均適用),操作簡便,成本低廉,復(fù)蘇方便,人員能隨時(shí)對(duì)微生物的狀態(tài)進(jìn)行觀察.缺點(diǎn)是保藏時(shí)間較短,需要經(jīng)常傳代處理,因連續(xù)傳代而容易引入基因突變或者雜菌,培養(yǎng)基的理化性質(zhì)及微生物代謝產(chǎn)物等原因還會(huì)導(dǎo)致微生物性狀發(fā)生改變.因此斜...
關(guān)于PCR，你知道多少？（四） ----幾種特殊的PCR
2025-10-13 1、錨定PCR（anchoredPCR）通常采用的PCR反應(yīng)必須知道欲擴(kuò)增的DNA或RNA片段兩側(cè)的序列，而在大多數(shù)情況下對(duì)某些序列本身或其旁側(cè)序列并不清楚，“錨定PCR”可以幫助克服序列未知或序列未知帶來的障礙。基本做法是：分離細(xì)胞總RNA或者mRNA，在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下合成cDNA，通過DNA末端轉(zhuǎn)移酶在cDNA3’末端加上poly（dG）尾巴。與此poly（dG）相對(duì)應(yīng)的錨定引物poly（dC）為保證擴(kuò)增特異性，建議此段旁聚（dC）在十二聚以上，5’端可帶上某些限制酶序...
關(guān)于PCR，你知道多少？（三）----Taq DNA聚合酶
2025-10-13 ----TaqDNA聚合酶在PCR反應(yīng)中，毫無疑問的DNA聚合酶是最關(guān)鍵的因素。PCR最初使用的DNA聚合酶是大腸桿菌DNA聚合酶I的Klenow片段。但該酶存在很多缺陷，使之不能廣為應(yīng)用，比如：熱穩(wěn)定性差，每次DNA熱變性后大部分酶都被滅活，需要重新加入，每個(gè)循環(huán)都要重新加入；Klenow酶反應(yīng)溫度較低，引物和模板容易形成非特異性配對(duì)，產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增。后來人們?cè)褂眠^T4DNA聚合酶和T7DNA聚合酶，兩者雖使擴(kuò)增特異性增加，且使DNA合成速度提高了，但是由于其對(duì)熱的穩(wěn)定...
關(guān)于PCR，你知道多少？（二）
2025-10-13 ----PCR反應(yīng)引物設(shè)計(jì)PCR反應(yīng)中引物起著很重要的作用。模板的不同、欲擴(kuò)增的片段不同、需要的片段長度不同或者是用途不同等等，對(duì)引物的要求是不一樣的。PCR作為一種體外酶促反應(yīng)，其效率和特異性主要取決于兩個(gè)方面，一是引物和模板結(jié)合的特異性，二是多聚酶對(duì)引物的有效延伸。引物設(shè)計(jì)的總原則就是提高擴(kuò)增的效率和特異性。引物設(shè)計(jì)的原則一般遵循下列幾項(xiàng)：1、引物的長度以15～30bp為宜。引物過短會(huì)使特異性降低，過長則成本增加，而且也會(huì)降低特異性。常用的是18-27bp，但不應(yīng)大于38...
關(guān)于PCR，你知道多少？（一）
2025-10-13 PCR的原理多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerasechainreaction）簡稱PCR技術(shù)，是近30多年發(fā)展起來的一種體外擴(kuò)增特異性DNA片段的技術(shù)，可在數(shù)小時(shí)之內(nèi)對(duì)僅有幾個(gè)拷貝的基因放大千萬倍。那么，PCR的原理是怎樣的呢？PCR技術(shù)實(shí)際上是在模板DNA、引物以及原料（四種脫氧核糖核苷酸）在適宜的反應(yīng)條件下，通過DNA聚合酶的酶促反應(yīng)完成DNA擴(kuò)增的過程。PCR技術(shù)的特異性取決于引物和模板DNA結(jié)合的特異性。PCR反應(yīng)分為三步：1）變性：通過加熱時(shí)DNA雙螺旋的氫鍵斷裂，雙...
多聚-L-賴氨酸(Poly-L-Lysine)的原理、應(yīng)用及配置
2025-10-10 多聚賴氨酸一般常見的分子量有70，000~150，000，150，000~300，000和300，000，分子量越大，黏附力越強(qiáng)，但相對(duì)充分溶解較困難。原理：多聚賴氨酸溶液是廣泛應(yīng)用的組織切片與玻片黏合劑，該多聚陽離子分子與組織切片上的陰離子相互作用會(huì)產(chǎn)生較強(qiáng)的黏合力。培養(yǎng)瓶表面的性質(zhì)對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)至關(guān)重要，細(xì)胞表面的糖蛋白（陰性）易于吸附在親水性的表面上，因而細(xì)胞培養(yǎng)表面如果有相當(dāng)含量的陽性電荷更能促進(jìn)細(xì)胞吸附，這正是運(yùn)用多聚賴氨酸優(yōu)化細(xì)胞培養(yǎng)表面的重要所在。應(yīng)用：適用組織學(xué)...
儀器今天準(zhǔn)不準(zhǔn)？看心情？不，看TA！
2025-09-30 嘿，實(shí)驗(yàn)室的小伙伴們！是不是偶爾也會(huì)懷疑人生（哦不，是懷疑儀器）？明明步驟沒錯(cuò)，結(jié)果卻飄忽不定……儀器今天的心情，是“精準(zhǔn)模式”還是“隨緣模式”？別甩鍋儀器！90%的“不準(zhǔn)”，都是沒做對(duì)“校準(zhǔn)”——儀器就像精準(zhǔn)的鐘表，用久了難免“走偏”：滲透儀養(yǎng)細(xì)胞、測體液的科研人，滲透儀非常重要，但這臺(tái)儀器用久了就會(huì)“記錯(cuò)刻度”，導(dǎo)致檢測數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確。粘度計(jì)黏度計(jì)靠“液體流過毛細(xì)管的速度”計(jì)算結(jié)果，但管子里黏了殘留液、溫度變了點(diǎn)，速度就不準(zhǔn)了。pH計(jì)pH計(jì)的電極老化、接觸空氣久了，就會(huì)把pH...
干貨分享 | 多姿多彩的“工具人”——熒光染料，點(diǎn)亮你的科研之路
2025-09-30 熒光染料是指吸收某一波長的光波后能發(fā)射出另一波長大于吸收光的光波的物質(zhì)。它們大多是含有苯環(huán)或雜環(huán)并帶有共軛雙鍵的化合物。熒光染料是生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用的工具由于靈敏度高，操作方便，逐漸取代了放射性同位素作為檢測標(biāo)記，其廣泛應(yīng)用于熒光免疫，熒光探針，細(xì)胞染色等。包括特異性的DNA染色，用于染色體分析、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡等相關(guān)研究。另有很多核酸染料在多色染色系統(tǒng)中是非常有用的復(fù)染劑，可作為背景對(duì)照，標(biāo)記細(xì)胞核使細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)的空間關(guān)系一目了然。Solarbio小分子系列包含了多種具有高...

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